El reparto de la serie Holby City incluye, entre otros:
Simona Zivkovska como Carlie Ryland (208 episodios), Joseph McFadden como Raffaello Di Lucca (220 episodios), Rob Ostlere como Arthur Digby (209 episodios), Bob Barrett como Sacha Levy (169 episodios), Hugh Quarshie como Ric Griffin (118 episodios), David Ames como Dominic Copeland (113 episodios), Guy Henry como Henrik Hanssen (105 episodios), David Paisley como Ben Saunders (104 episodios), Rosie Marcel como Jac Naylor (98 episodios), Jemma Redgrave como Bernie Wolfe (69 episodios), Jeremy Edwards como Danny Shaughnessy (68 episodios), Chizzy Akudolu como Mo Effanga (65 episodios)